一、產(chǎn)品簡介

CHO細(xì)胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒——PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit，是一款高效經(jīng)濟(jì)的核酸轉(zhuǎn)染試劑，專門用于在CHO懸浮細(xì)胞進(jìn)行重 組蛋白生產(chǎn)的試劑盒，包含轉(zhuǎn)染試劑、稀釋液、無血清培養(yǎng)基、補(bǔ)料、增強(qiáng)劑等組分，具有操作簡單、價(jià)格便宜、 蛋白產(chǎn)量高等優(yōu)點(diǎn)。

PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit適用范圍：CHO細(xì)胞的高密度無血清懸浮培養(yǎng)、DNA 瞬時(shí)轉(zhuǎn)染及蛋白表達(dá)。

二、實(shí)驗(yàn)操作流程

1.細(xì)胞接種（以25mL體系為例）：

根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)，選擇合適的接種密度，建議接種密度為2.5~3×10⁶ cells/mL，待第二天細(xì)胞密度達(dá)到6×10⁶ cells/mL左右，活性大于95%時(shí)進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

2.瞬時(shí)轉(zhuǎn)染：

建議質(zhì)粒（μg）與試劑（μL）參考配比區(qū)間為1:2~1:4之間。具體步驟如圖1所示（以1:3為例）：

（1）使用本樣品前渦旋混勻5秒，使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀釋75 μL的轉(zhuǎn)染試劑，并吹打均勻；

（2）使用1.25 mL PolyTool™ CHO Medium稀釋25 μg質(zhì)粒，并吹打混勻；

（3）將(1)和(2)所述溶液混合均勻；

（4）將(3)所述混合溶液室溫靜置孵育10~15 min；

（5）將(4)中的復(fù)合物溶液加入25 mL的細(xì)胞培養(yǎng)體系中，放回?fù)u床中，在37 ℃、震蕩速度120 rpm下繼續(xù)培養(yǎng)。

3.產(chǎn)物表達(dá)與檢測：

（1）轉(zhuǎn)染24小時(shí)、72小時(shí)、120小時(shí)、168小時(shí)后加入3%（0.75 mL/25 mL）PolyTool™ CHO S1補(bǔ)料、0.3%（75 μL/25 mL）PolyTool™ CHO S2補(bǔ)料。

若想獲得高表達(dá)效果，24 小時(shí)添加完補(bǔ)料后，將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至32℃搖床培養(yǎng)箱中進(jìn)行低溫表達(dá)（葡萄糖控制在 4~8 g/L）。

（2）轉(zhuǎn)染后第 6~8 天測定產(chǎn)物表達(dá)量。大多數(shù)蛋白的合成在轉(zhuǎn)染后第7天左右可達(dá)到最高值，客戶可根據(jù)細(xì)胞狀態(tài)及表達(dá)量選擇適宜的收獲時(shí)間。

 圖1 細(xì)胞轉(zhuǎn)染示意圖

CHO細(xì)胞專用轉(zhuǎn)染試劑盒PolyTool™ CHO-Fit Transfection Reagent Kit代理——天津益元利康生物科技有限公司，成立于2018年，坐落于天津經(jīng)濟(jì)技術(shù)開發(fā)區(qū)。公司產(chǎn)品線涉及細(xì)胞與基因治療、免疫學(xué)、分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等多個(gè)方向，專注于生命科學(xué)試劑、耗材、細(xì)胞、儀器等產(chǎn)品銷售，經(jīng)營的品牌主要有：ThermoFisher、Sigma、Qiagen、EZBioscience、ZYMO Research、MedKoo、Abcam等等。我們提供質(zhì)優(yōu)價(jià)美的產(chǎn)品、及時(shí)到位的服務(wù)，努力成長為生命科學(xué)和生物技術(shù)企業(yè)的優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商。