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瞬時(shí)轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染常見誤區(qū)

 更新時(shí)間:2024-11-12    點(diǎn)擊量:43
  誤區(qū)一:穩(wěn)定轉(zhuǎn)染目的基因會(huì)整合到染色體,瞬時(shí)轉(zhuǎn)染不會(huì)
 
  這個(gè)答案是否定的,因?yàn)闊o論是瞬時(shí)轉(zhuǎn)染還是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染,DNA都會(huì)被引入細(xì)胞核并以一定的概率隨機(jī)地整合到宿主染色體;差別在于,穩(wěn)定轉(zhuǎn)染所使用的質(zhì)粒含有抗性基因,隨后通過藥物篩選,將未轉(zhuǎn)入目的基因的細(xì)胞消除,留下的則是成功轉(zhuǎn)入目的基因的細(xì)胞,因此經(jīng)過一段時(shí)間的藥物篩選,留存下來的細(xì)胞都是能夠穩(wěn)定傳遞的細(xì)胞,稱之為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染;而瞬時(shí)轉(zhuǎn)染由于缺乏藥物壓力篩選,再加上只有少量細(xì)胞中有目的基因整合到染色體,因此在傳代過程中,陽性細(xì)胞會(huì)逐漸減少,導(dǎo)致表達(dá)量逐漸降低,最終無法長(zhǎng)期穩(wěn)定表達(dá)。
 
  誤區(qū)二:只有慢病毒感染才能構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株
 
  可以用來進(jìn)行快速轉(zhuǎn)染的轉(zhuǎn)染方法,同樣適用于構(gòu)建穩(wěn)定的細(xì)胞株,例如電穿孔法、化學(xué)試劑轉(zhuǎn)染和慢病毒感染等。只是這三種轉(zhuǎn)染方法在具體應(yīng)用上可能會(huì)有一些差異。需要特別注意的是,在進(jìn)行RNA轉(zhuǎn)染時(shí),由于RNA不需要進(jìn)入細(xì)胞核,因此通常只用于短期轉(zhuǎn)染表達(dá)。
 
  誤區(qū)三:構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株費(fèi)時(shí)費(fèi)力,周期長(zhǎng),不確定性高,常規(guī)實(shí)驗(yàn)室不方便構(gòu)建
 
  細(xì)胞株構(gòu)建需要通過藥物加壓篩選,與瞬轉(zhuǎn)相比周期長(zhǎng),但在進(jìn)行科學(xué)研究時(shí),確定了一個(gè)長(zhǎng)期研究的靶標(biāo),后續(xù)都會(huì)針對(duì)某一基因進(jìn)行相關(guān)實(shí)驗(yàn),那么這個(gè)時(shí)候構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株就顯得尤為必要,畢竟細(xì)胞株相較于瞬轉(zhuǎn)來說,最大的優(yōu)點(diǎn)就是表達(dá)穩(wěn)定性高,批間差異小,實(shí)驗(yàn)結(jié)果可靠性更高。
 
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