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產品名稱：南京建成丙氨酸氨基轉移酶測試盒微板法(C009-2-1)現(xiàn)貨供應
產品貨號：C009-2-1
產品品牌：南京建成
產品規(guī)格：96T
操作過程：
1、樣本前處理:
①、血清（漿）及其它液體樣本待測：直接測定。
②、動物組織樣本：準確稱取組織重量，按重量（g）：體積 (mL)=1:9 的比例，加入 9 倍體積的生理鹽水，冰水浴條件 下機械勻漿，2500 轉/分，離心 10 分鐘，取上清液待測。
③、培養(yǎng)細胞樣本前處理：將收集好的細胞用等滲緩沖液（推 薦 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）清洗 1～ 2 次；1000 轉/分,離心 10 分鐘,棄上清,留細胞沉淀，加入勻 漿介質（推薦加入 0.1mol/L pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生 理鹽水），冰水浴條件下超聲破碎或手動勻漿，制備好的 勻漿液不離心，待測。
2、操作表：
測定孔 | 對照孔 | |
基質液（μL）37℃已預溫 | 20 | 20 |
待測樣本（μL） | 5 | |
37℃反應 30 分鐘 (測定孔每吸取一個樣本，將吸嘴伸入孔板底部基質液中， 反復吸打混勻,但注意不要吸入氣泡) | ||
2，4—二硝基苯肼液（μL） | 20 | 20 |
待測樣本（μL） | 5 | |
37℃反應 20 分鐘 (對照孔每吸取一個樣本，將吸嘴伸入孔板底部液體中，反 復吸打混勻, 但注意不要吸入氣泡) | ||
0.4mol/L 氫氧化鈉液（μL） | 200 | 200 |
輕輕水平搖動 96 孔板混勻，室溫放置 15 分鐘，波長 510nm，酶標儀測定各孔 OD 值，以絕對 OD 值(測定孔 OD 值減去對照孔 OD 值），查標準曲線，求得相應的 ALT/GPT 活力單位。 | ||
注意事項：
1、比色法中常用的有賴氏（Reitman-Frankel）法及金氏（King）法。賴氏法標準曲線所定單位數，是用實驗方法和卡門氏分光 光度法（速率法）作對比測定求得的。以卡門氏單位報告結果，比較準確。 卡門氏單位定義：1mL 液體，反應液總容量3mL，波長340nm，1cm 光徑，25℃，1min 內所生成的丙酮酸，使NADH氧化成 NAD+而引起吸光度每下降0.001 為一個單位（1卡門氏單位=0.482 U/L，25℃）。
2、一般血清標本內源性酮酸很少，血清對照孔吸光度值接近試劑空白孔（以雙蒸水代替血清，其他和對照孔同樣操作）。所以，成批標本測定時，一般不需要每一標本都作本身血清對照孔，以試劑空白孔代替即可，但對脂血、黃疸或溶血血清，每份標本應作對照孔。
3、酶活力超過 150 卡門氏單位時，用生理鹽水稀釋血清后重測。
4、應將一般血清的對照孔（或稱標本空白孔）的吸光度作為日常質控的指標之一；如相差大，可考慮α-酮戊二酸濃度、DNPH濃度及儀器等原因引起。
5、血清中 ALT 在室溫（25℃）可保存2 天，在0～4℃可保存一周，在-25℃可保存 1 個月。
歡迎訂購：
貨號 | 產品名稱 | 規(guī)格 |
C009-2-1 | Alanine aminotransferase Assay Kit | 96T |
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